RNA pull-down實驗是檢測與目的RNA結(jié)合的蛋白質(zhì)。使用體外轉(zhuǎn)錄法標(biāo)記生物素RNA探針,然后與胞漿蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物。該復(fù)合物可與鏈霉親和素標(biāo)記的磁珠結(jié)合,從而與孵育液中的其他成分分離。復(fù)合物洗脫后,通過western blot實驗檢測特定的RNA結(jié)合蛋白是否與RNA相互作用。
1. 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、涂板、搖菌
2. 質(zhì)粒中提
3. 質(zhì)粒線性化
4. 瓊脂糖凝膠電泳、切膠回收
5. 轉(zhuǎn)錄以及生物素標(biāo)記、檢測
1. 蛋白質(zhì)、組織、細(xì)胞:-80℃保存,干冰運(yùn)輸;
2. 血液:EDTA抗凝管,4℃運(yùn)輸。