染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)的原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，并將其隨機(jī)切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。這項(xiàng)技術(shù)通過蛋白質(zhì)與DNA互作來分析目標(biāo)基因活性以及已知蛋白質(zhì)的靶基因，被廣泛應(yīng)用于體內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子與靶基因啟動子上特異核苷酸序列結(jié)合方面的研究。該技術(shù)常與DNA芯片和分子克隆技術(shù)相結(jié)合。
1. 細(xì)胞固定
2. 染色質(zhì)斷裂
3. 染色質(zhì)免疫沉淀
4. 交聯(lián)反應(yīng)的逆轉(zhuǎn)
5. DNA的純化
6. DNA的鑒定。
1. 貼壁細(xì)胞：用胰酶將細(xì)胞消化下來，或用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。
2. 懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液1000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。
3. 細(xì)胞上清：3000轉(zhuǎn)/分，離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。
